Проверка врожденного иммунитета
                Ингибирование cGAS человека и мыши с помощью RU.521 снижает экспрессию интерферона во множественных типах клеток. Использовались следующие линии: клетки THP-1 и его производные (a – c), клетки RAW 267.4 (d) и HEK293 (e – g). Клетки THP-1 KO-cGAS трансфицировали либо векторным плазмидным контролем, либо плазмидой, содержащей h-cGAS, и обрабатывали либо носителем (ДМСО), либо RU.521 (а, левая панель). Клетки WT THP-1 подвергали ложной обработке (не) или стимулировали 0,3 мкг/мл HT-DNA +/- RU.521 с последующим анализом RT-qPCR для экспрессии IFNB1 (a, правая панель). ELISA для человеческого IFNB1 также проводили на клетках THP-1, стимулированных HT-DNA +/- RU.521 (0,8 мкМ) (b). Кривая доза-ответ была получена для RU.521 с использованием иммуно-активированных клеток THP-1 Lucia ISG (c). Клетки RAW-Lucia ISG KO cGAS трансфицировали плазмидами, экспрессирующими WT m-cGAS или h-cGAS, и активность считывали через репортер люциферазы (d). Клетки HEK293 трансфицировали cGAS человека или мыши в дополнение к h-STING в присутствии или отсутствии RU.521. Уровни РНК для IFNB1 и IFIT2 затем измеряли с помощью RT-КПЦР (e, f). Трансфекция векторного остова была использована для нормализации данных. Иммуноблот-анализ трансфицированных h-STING, h-cGAS и m-cGAS в клетки HEK293 +/- RU.521 показывает, что экспрессия белка не изменяется при добавлении небольшой молекулы. GM130 был использован для нормализации данных (г). Минимальное количество биологических и технических повторностей для анализов составляло три и три соответственно (n=9). Столбики ошибок представляют SEM. Звездочки (*) обозначают P ≤ 0,05, где для сравнения результатов использовался непарный t-критерий с поправкой Уэлча. Предоставлено: Научные отчеты (2020). DOI: 10.1038/s41598-020-64348-й

Белок cGAS играет важную роль в клеточном врожденном иммунитете, обнаруживая ДНК патогенных микроорганизмов, таких как бактерии и вирусы, или нашу собственную поврежденную и неправильно локализованную ДНК. Активация сигнального пути cGAS-STING вызывает провоспалительный иммунный ответ, и длительная активация cGAS может привести к волчаноподобным аутоиммунным нарушениям.

Мануэль Аскано, доктор философии, и его коллеги ранее идентифицировали соединение RU.521 в качестве ингибитора мышиного cGAS. Теперь они демонстрируют, что RU.521 также сильно и избирательно ингибирует человеческий cGAS в клеточных линиях и в первичных клетках человека. Они показали, что RU.521 подавляет активность cGAS в зависимости от дозы и не подавляет иммунные ответы, активированные не-ДНК-сигналами.

Исследование, опубликованное 5 мая в Scientific Reports, подтверждает использование RU.521 в качестве инструмента для оценки вклада сигнальной оси cGAS-STING в различные иммунные ответы. Соединение может также служить химическим каркасом для разработки потенциальной терапии аутоиммунных заболеваний, связанных с cGAS.




Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *